蛋白質(zhì)測(cè)定儀操作方法粗談
來(lái)源: 本站 類別:實(shí)用技術(shù) 更新時(shí)間:2010-08-17 閱讀次
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蛋白質(zhì)測(cè)定儀操作方法粗談
蛋白質(zhì)測(cè)定儀是用于測(cè)定糧食、食品、乳制品、飲料、飼料、土壤、水等物質(zhì)中氮或者蛋白質(zhì)含量的儀器,因?yàn)樗鶞y(cè)出的物質(zhì)不僅含有蛋白質(zhì),同時(shí)還含有游離氨基酸、嘌呤、吡啶、尿素、硝酸鹽和氨等物質(zhì),因此該儀器又被稱為粗蛋白測(cè)定儀。
蛋白質(zhì)測(cè)定儀包括兩個(gè)裝置:消化爐和蒸餾裝置,分別用來(lái)消化樣品以及蒸餾和滴定。浙江托普生產(chǎn)的蛋白質(zhì)測(cè)定儀的消化爐有多種孔數(shù)選擇,如4孔、8孔、12孔和20孔,根據(jù)消化爐不同孔數(shù),我們可以將定氮儀分為不同的型號(hào)。如KDN-04A、KDN-08C等。下面我們具體介紹下蛋白質(zhì)測(cè)定儀在測(cè)定蛋白質(zhì)含量時(shí)的操作步驟。
消化:稱取經(jīng)粉碎的樣品0.5克(視含氮量而定),放入已洗滌烘干的消化管中,加催化劑5克左右和10ml左右硫酸(如果是固體樣品,最好在加濃硫酸前先加3ml左右的蒸餾水以濕潤(rùn)樣品,以防止?jié)饬蛩嵊龅綇?qiáng)堿發(fā)生劇烈反應(yīng))。將消化管放入消化架的各個(gè)孔內(nèi),然后置于消化爐上,然后開啟抽氣三通上自來(lái)水龍頭,使抽氣三通處于吸氣狀態(tài),接通電源開始消煮。消化管有不同的孔數(shù)區(qū)別,你可以按照樣品數(shù)的多少來(lái)選擇。每?jī)蓚(gè)消化爐孔共用一個(gè)進(jìn)出水開關(guān)。
蒸餾:(1)打開電源,儀器自動(dòng)進(jìn)入加水狀態(tài),待加水工作完成后會(huì)自動(dòng)停止。(2)在左邊托盤放上空的消化管,右邊放上空的三角瓶,打開水龍頭開關(guān)。為排空管路內(nèi)空氣,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先按下加酸鍵,待液體流順暢后停止加酸;加堿同樣操作。按下蒸餾鍵,儀器開始進(jìn)入蒸餾狀態(tài),待蒸氣自動(dòng)從噴射管中噴出并穩(wěn)定后,關(guān)閉開關(guān)。在左邊托盤放上已消化冷卻好的樣品,右邊托盤放上250ml三角瓶,并使管口碰到杯底。再打開電源,依次按加酸、加堿、蒸餾鍵對(duì)樣品進(jìn)行蒸餾(加酸、加堿量設(shè)定自行)。蒸餾完畢后,將三角瓶下移,使接收管離開液面,用水沖洗出氣口,繼續(xù)蒸餾半分鐘后,取下三角瓶待滴定用。第二個(gè)樣品同上方法。(3)關(guān)開關(guān),關(guān)水龍頭,取下消化管,打開側(cè)面排水夾子,把連堿泵的膠管放入蒸餾水容器內(nèi),打開電源開關(guān)用手按加堿按鍵抽蒸餾水清洗堿泵,酸泵同樣清洗,最后關(guān)電結(jié)束。
滴定:用0.1 NHCL滴定接收瓶?jī)?nèi)的溶液,滴定至粉紅色時(shí)為止,記下消耗HCL的毫升數(shù),按下列式子計(jì)算蛋白含量:
蛋白質(zhì)%=
式中:X—樣品中蛋白質(zhì)的含量,%
V1—樣品消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積,ml;
V2—試劑空白消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積,ml;
N—硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液當(dāng)量濃度;
0.014—1N硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml相當(dāng)于氮克數(shù);
m—樣品的質(zhì)量(體積),g(ml);
F—蛋白質(zhì)系數(shù),按16%計(jì)算乘以6.25即為蛋白質(zhì)。
(空白測(cè)定:用0.1克糖代替樣品或不加樣品作空白測(cè)定)
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