測量綠色植物組織或器官中葉綠素含量的方法
來源： http://m.52lvi.cn/ 類別：實用技術 更新時間：2013-05-14 閱讀次
【本資訊由中國糧油儀器網(wǎng)提供】 測量綠色植物組織或器官中葉綠素含量的原理：根據(jù)葉綠家對可見光的吸收光譜，利用分光光度計在某一特定波長下測定其吸光度，而后公式計算葉綠素含量。
根據(jù)朗伯—比爾定律，某有色溶液的吸光皮A應與其濃度c和液層厚度L成比例，即：
A＝KCL
式中l(wèi)x為比例常數(shù)，當溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為1cm時，K為該物質的比吸收系數(shù)。各種有色物質溶液在不同波長下的比吸收系數(shù)可通過測定已知濃度的純物質在不同波長的吸光值而求得。
如果溶液中有數(shù)種吸光物質，則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應波長下吸光度的總和，這就是吸光度的加和性。如欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b、葉黃素、胡蘿卜素的含量，只需測定該提取液在3個特定波長下的吸光度A，并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的比吸收系數(shù)即可求出其濃度。在測定葉綠素a、b時，為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光應選擇葉綠索在紅光區(qū)的最大吸收峰。
儀器設備：1.分光光度計：1臺；葉綠素檢測儀：1臺。2.研缽：1臺.3.員簡：1個。4.剪刀：1把。5.50mL量瓶：1個。6.玻璃棒。7.1cm漏斗：1個。8.7cm濾紙：1張。9.滴管：1支。試劑：80％丙酮。材料：任何綠色植物組織或器官。
測量綠色植物組織或器官中葉綠素含量的方法步驟：
（一）研磨法玻璃棒。
7cm濾紙：1張。
1.取樣、剪碎、混勻，然后稱取新鮮樣品1.18g。
2.樣品置研缽中，加少量CaC03和石英砂及0.5mL純丙酮研成勻漿，再加80％丙酮10mL繼續(xù)研磨至組織變?yōu)榘咨?BR> 3.取濾紙一張，放入漏斗中用80％丙酮濕潤，把提取液倒入漏斗中，濾入25mL量瓶里，用少量丙酮沖洗研體數(shù)次，最后連殘渣起倒人漏斗。
4.用滴管吸取80％丙酮，一滴一滴的將濾紙上的叫綠家提取液全部洗入量瓶內(nèi)，直到濾紙和殘渣中無綠色為止。最后用80％丙酮定容至25mL。
5.把葉綠體色素提取液倒人光徑1cm的比色杯內(nèi)，分光光度計分別在波長645nm、663nm和652nm下測定吸光度，以80％丙酮為空白對照，并于葉綠素檢測儀的測量值進行對比分析。
6.分別計算葉綠素)a、b)和葉綠素的總濃度(mg/L)，若用96％乙醇，需在波長665nm、649nm和470nm下測定吸光度，則計算葉綠素a、b和類胡蘿卜素含量，相加即得葉綠素總濃度。
7.求得色素濃度后冉按下式計算組織中各色家含量(用mg•g“鮮重或干重表水)式中，C：葉綠體色素的濃度(mg/L)小w：鮮重(g)lv：提取液總體積(ml)；稀釋倍數(shù)。
（二）直接浸提法
1.將新鮮小麥M1片剪成0.2cm左方的細絲或小塊混合均勻后.稱取0.10—0.20825mL容量瓶或具塞刻度試管中。
2在容量瓶或試管中加入0.5mL純丙酮和10—15mL80％的丙酮，并仔細將就附在瓶壁邊緣的葉片碎末洗到丙酮溶液中去，蓋上瓶塞，室溫下置暗處浸提過夜4其間搖動3—4次。
3.次日取出容量瓶，觀察nl組織巳全部交白時，表示葉綠素已浸提干凈，然后用80％丙酮定容至25mL刻度，過濾或離心后，與研磨法同樣進行比色測定。
（三）注意事項：
1.為了避免葉綠素的光分解，操作應在弱光進行。并盡可能縮短研磨時間2min為宜。
2.克接浸提法也可采用丙酮一乙醇—水混合液，其配制比例為：純丙酮：無水乙醇：蒸餾水。
3.若是干材料，可經(jīng)研磨過篩后，稱取0.10g左右、與鮮樣同法浸提(但不用加0.5mL純丙酮)。
4.用分光光度法測定葉綠體色素含量，對分光光度計本身的精確性要求較高，分光光度計在使用前需對波長進行校正。校正的方法除按儀器說明校正外，還應以純的葉綠素a和b來校正。因為即使用國產(chǎn)儀器中性能較好的7200型分光光度計，經(jīng)校正后在660-700nm波段中的讀數(shù)誤差還可能有12nm，這對測定葉綠索a，b值已有影響，具體校正步驟可參照參文獻中的方法進行。
根據(jù)朗伯—比爾定律，某有色溶液的吸光皮A應與其濃度c和液層厚度L成比例，即：
A＝KCL
式中l(wèi)x為比例常數(shù)，當溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為1cm時，K為該物質的比吸收系數(shù)。各種有色物質溶液在不同波長下的比吸收系數(shù)可通過測定已知濃度的純物質在不同波長的吸光值而求得。
如果溶液中有數(shù)種吸光物質，則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應波長下吸光度的總和，這就是吸光度的加和性。如欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b、葉黃素、胡蘿卜素的含量，只需測定該提取液在3個特定波長下的吸光度A，并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的比吸收系數(shù)即可求出其濃度。在測定葉綠素a、b時，為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光應選擇葉綠索在紅光區(qū)的最大吸收峰。
儀器設備：1.分光光度計：1臺；葉綠素檢測儀：1臺。2.研缽：1臺.3.員簡：1個。4.剪刀：1把。5.50mL量瓶：1個。6.玻璃棒。7.1cm漏斗：1個。8.7cm濾紙：1張。9.滴管：1支。試劑：80％丙酮。材料：任何綠色植物組織或器官。
測量綠色植物組織或器官中葉綠素含量的方法步驟：
（一）研磨法玻璃棒。
7cm濾紙：1張。
1.取樣、剪碎、混勻，然后稱取新鮮樣品1.18g。
2.樣品置研缽中，加少量CaC03和石英砂及0.5mL純丙酮研成勻漿，再加80％丙酮10mL繼續(xù)研磨至組織變?yōu)榘咨?BR> 3.取濾紙一張，放入漏斗中用80％丙酮濕潤，把提取液倒入漏斗中，濾入25mL量瓶里，用少量丙酮沖洗研體數(shù)次，最后連殘渣起倒人漏斗。
4.用滴管吸取80％丙酮，一滴一滴的將濾紙上的叫綠家提取液全部洗入量瓶內(nèi)，直到濾紙和殘渣中無綠色為止。最后用80％丙酮定容至25mL。
5.把葉綠體色素提取液倒人光徑1cm的比色杯內(nèi)，分光光度計分別在波長645nm、663nm和652nm下測定吸光度，以80％丙酮為空白對照，并于葉綠素檢測儀的測量值進行對比分析。
6.分別計算葉綠素)a、b)和葉綠素的總濃度(mg/L)，若用96％乙醇，需在波長665nm、649nm和470nm下測定吸光度，則計算葉綠素a、b和類胡蘿卜素含量，相加即得葉綠素總濃度。
7.求得色素濃度后冉按下式計算組織中各色家含量(用mg•g“鮮重或干重表水)式中，C：葉綠體色素的濃度(mg/L)小w：鮮重(g)lv：提取液總體積(ml)；稀釋倍數(shù)。
（二）直接浸提法
1.將新鮮小麥M1片剪成0.2cm左方的細絲或小塊混合均勻后.稱取0.10—0.20825mL容量瓶或具塞刻度試管中。
2在容量瓶或試管中加入0.5mL純丙酮和10—15mL80％的丙酮，并仔細將就附在瓶壁邊緣的葉片碎末洗到丙酮溶液中去，蓋上瓶塞，室溫下置暗處浸提過夜4其間搖動3—4次。
3.次日取出容量瓶，觀察nl組織巳全部交白時，表示葉綠素已浸提干凈，然后用80％丙酮定容至25mL刻度，過濾或離心后，與研磨法同樣進行比色測定。
（三）注意事項：
1.為了避免葉綠素的光分解，操作應在弱光進行。并盡可能縮短研磨時間2min為宜。
2.克接浸提法也可采用丙酮一乙醇—水混合液，其配制比例為：純丙酮：無水乙醇：蒸餾水。
3.若是干材料，可經(jīng)研磨過篩后，稱取0.10g左右、與鮮樣同法浸提(但不用加0.5mL純丙酮)。
4.用分光光度法測定葉綠體色素含量，對分光光度計本身的精確性要求較高，分光光度計在使用前需對波長進行校正。校正的方法除按儀器說明校正外，還應以純的葉綠素a和b來校正。因為即使用國產(chǎn)儀器中性能較好的7200型分光光度計，經(jīng)校正后在660-700nm波段中的讀數(shù)誤差還可能有12nm，這對測定葉綠索a，b值已有影響，具體校正步驟可參照參文獻中的方法進行。
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