油脂中脂肪酸含量測(cè)定
油脂 中脂肪酸含量測(cè)定
――― 氣相色譜法測(cè)定大豆油中脂肪酸成分
油脂是食品加工中重要的原料和輔料，也是食品的重要組分和營(yíng)養(yǎng)成分。必需脂肪酸是維持人體生理活動(dòng)的必要條件，人體所必需的脂肪酸一般取自食品用油，即食用油脂。氣象色譜法測(cè)定油脂脂肪酸組分是現(xiàn)在最常用的方法，也是一些相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)（如：GB/T17377）規(guī)定應(yīng)用的檢測(cè)方法。
甲酯化是分析動(dòng)植物油脂脂肪酸成分的常用的前處理方法，也是常用的標(biāo)準(zhǔn)方法（GB/T 17376-1998）。
二、原理
本實(shí)驗(yàn)甲酯化方法采用國(guó)標(biāo)--GB/T 17376-1998，甘油酯皂化后，釋出的脂肪酸在三氟化硼存在下進(jìn)行酯化，萃取得到脂肪酸甲酯用于氣象色譜分析。
樣品中的脂肪酸（甘油酯）經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)那疤幚恚柞セ┖螅M(jìn)樣，樣品在汽化室被汽化，在一定的溫度下，汽化的樣品隨載氣通過(guò)色譜柱，由于樣品中組分與固定相間相互用的強(qiáng)弱不同而被逐一分離，分離后的組分，到達(dá)檢測(cè)器（detceter）時(shí)經(jīng)檢測(cè)口的相應(yīng)處理（如FID的火焰離子化），產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)。根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，歸一法確定不同脂肪酸的百分含量。
三、儀器與試劑
（一）儀器
1．氣相色譜儀：具氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）。
2．恒溫水浴鍋
3．移液管
4．膠頭滴管
5．小圓底燒瓶
6．冷凝管
7. 樣品瓶
（二）試劑
1.正己烷：分析純，沸程60～90℃或30～60℃，重蒸。
2.氫氧化鉀甲醇溶液
3.三氟化硼甲醇溶液
4.飽和食鹽水
5.市售大豆油
四、實(shí)驗(yàn)步驟
（一）樣品預(yù)處理
甲酯化：
取2~4滴大豆油樣品于xml的圓底燒瓶中，加入3ml的KOH甲醇溶液，70℃水浴加熱回流5min；取出冷卻至室溫（可用水冷），加入5ml三氟化硼溶液，70℃水浴加熱回流5min；取出冷卻至室溫，加入3ml正己烷，70℃水浴加熱回流5min；取出冷卻至室溫，加入適量飽和食鹽水溶液，靜止3~5min，取上層油樣1ml于試樣瓶中，進(jìn)GC分析。
測(cè)定：
（1）氣相色譜條件
①色譜柱：石英彈性毛細(xì)管柱，0.25mm（內(nèi)徑）×60m，內(nèi)膜厚度0.32。
②程序升溫： 150℃保持3min，5℃/min升溫至220℃，保持10min；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度300℃。
③氣體流速：氮?dú)猓?0mL/min，氫氣：40mL/min，空氣：450mL/min，分流比30﹕1。
④柱前壓：25kpa
（2）色譜分析
自動(dòng)進(jìn)樣，吸取1μL試樣液注入氣相色譜儀，記錄色譜峰的保留時(shí)間和峰高。利用標(biāo)準(zhǔn)圖譜確定每個(gè)色譜峰的性質(zhì)（定性），利用軟件自帶的自動(dòng)積分方法計(jì)算各脂肪酸組分的百分含量。
五、注意事項(xiàng)
1．本法檢測(cè)靈敏度高，在分析時(shí)應(yīng)注意防止由于色譜柱中高沸點(diǎn)固定液、樣品凈化不完全及載氣不純等帶來(lái)的污染，使其靈敏度下降。
2．本方法采用極性色譜柱，樣品處理時(shí)應(yīng)盡力保證脫水徹底。
3．本實(shí)驗(yàn)采用自動(dòng)進(jìn)樣，序列采集，工作站在序列運(yùn)行之后不再允許更改序列采集方法，所以在運(yùn)行某一序列之前應(yīng)確認(rèn)程序編輯無(wú)誤。
4．為了保護(hù)毛細(xì)管柱，一定要確認(rèn)升溫程序在該型號(hào)色譜柱的溫度允許范圍內(nèi)。
