食品中山梨酸、苯甲酸的測(cè)定方法
1主題內(nèi)容與適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醬油、水果汁、果醬等食品中山梨酸、苯甲酸含量的測(cè)定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于醬油、水果汁、果醬等食品中山梨酸、苯甲酸含量的測(cè)定。
最低檢出濃度：氣相色譜法最低檢出量為1μg，用于色譜分析的樣品為1g時(shí)，最低檢出濃度為1mg/kg。
第一篇?dú)庀嗌V法(第一法)
2原理
樣品酸化后，用乙醚提取山梨酸、苯甲酸，用附氫火焰離子化檢測(cè)器的氣相色譜儀進(jìn)行分離測(cè)定，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。
3試劑
3.1乙醚：不含過(guò)氧化物。
3.2石油醚：沸程30～60℃。
3.3鹽酸。
3.4無(wú)水硫酸鈉。
3.5鹽酸(1＋1)：取100mL鹽酸，加水稀釋至200mL。
3.6氯化鈉酸性溶液(40g/L)：于氯化鈉溶液(40g/L)中加少量鹽酸(1＋1)酸化。
3.7山梨酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取山梨酸、苯甲酸各0.2000g，置于100mL容量瓶中，用石油醚—乙醚(3＋1)混合溶劑溶解后并稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于2.0mg山梨酸或苯甲酸。
3.8山梨酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取適量的山梨酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，以石油醚－乙醚(3＋1)混合溶劑稀釋至每毫升相當(dāng)于50，100，150，200，250mg山梨酸或苯甲酸。
4儀器
氣相色譜儀：具有氫火焰離子化檢測(cè)器。
5分析步驟
5.1樣品提取
稱取2.50g事先混合均勻的樣品，置于25mL帶塞量筒中，加0.5mL鹽酸(1＋1)酸化，用15，10mL乙醚提取兩次，每次振搖1min，將上層乙醚提取液吸入另一個(gè)25mL帶塞量筒中。合并乙醚提取液。用3mL氯化鈉酸性溶液(40g/L)洗滌兩次，靜止15min，用滴管將乙醚層通過(guò)無(wú)水硫酸鈉濾入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混勻。準(zhǔn)確吸取5mL乙醚提取液于5mL帶塞刻度試管中，置40℃水浴上揮干，加入2mL石油醚－乙醚(3＋1)混合溶劑溶解殘?jiān)�，備用�?
5.2色譜參考條件
5.2.1色譜柱：玻璃柱，內(nèi)徑3mm，長(zhǎng)2m，內(nèi)裝涂以5%(m/m)DEGS＋1%(m/m)H3PO4固定液的60～80目ChromosorbWAW。
5.2.2氣流速度：載氣為氮?dú)猓?0mL/min(氮?dú)夂涂諝狻錃庵劝锤鲀x器型號(hào)不同選擇各自的最佳比例條件)。
5.2.3溫度：進(jìn)樣口230℃；檢測(cè)器230℃；柱溫170℃。
5.3測(cè)定
進(jìn)樣2μL標(biāo)準(zhǔn)系列中各濃度標(biāo)準(zhǔn)使用液于氣相色譜儀中，可測(cè)得不同濃度山梨酸、苯甲酸的峰高，以濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰高值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
同時(shí)進(jìn)樣2μL樣品溶液。測(cè)得峰高與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。
5.4計(jì)算
式中：X1——樣品中山梨酸或苯甲酸的含量，g/kg；
m1——測(cè)定用樣品液中山梨酸或苯甲酸的質(zhì)量，μg；
V1——加入石油醚－乙醚(3＋1)混合溶劑的體積，mL；
V2——測(cè)定時(shí)進(jìn)樣的體積，μL；
m2——樣品的質(zhì)量，g；
5——測(cè)定時(shí)吸取乙醚提取液的體積，mL；
25——樣品乙醚提取液的總體積，mL。
由測(cè)得苯甲酸的量乘以1.18，即為樣品中苯甲酸鈉的含量。
結(jié)果的表述：報(bào)告算術(shù)平均值的二位有效數(shù)。
5.5允許差
相對(duì)相差≤10%。
5.6其他
在色譜圖中山梨酸保留時(shí)間為2分53秒；苯甲酸保留時(shí)間為6分8秒。
（圖略）
第二篇高效液相色譜法(第二法)
6原理
樣品加溫除去二氧化碳和乙醇，調(diào)pH至近中性，過(guò)濾后進(jìn)高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離后，根據(jù)保留時(shí)間和峰面積進(jìn)行定性和定量。
7試劑
方法中所用試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純?cè)噭�，水為蒸餾水或同等純度水，溶液為水溶液。
7.1甲醇：經(jīng)濾膜(0.5μm)過(guò)濾。
7.2稀氨水(1＋1)：氨水加水等體積混合。
7.3乙酸銨溶液(0.02mol/L)：稱取1.54g乙酸銨，加水至1000mL，溶解，經(jīng)濾膜(0.45μm)過(guò)濾。
7.4碳酸氫鈉溶液(20g/L)：稱取2g碳酸氫鈉(優(yōu)級(jí)純)，加水至100mL，振搖溶解。
7.5苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取0.1000g苯甲酸，加碳酸氫鈉溶液(20g/L)5mL，加熱溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，苯甲酸含量為1mg/mL，作為儲(chǔ)備溶液。
7.6山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取0.1000g山梨酸，加碳酸氫鈉溶液(20g/L)5mL，加熱溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量為1mg/mL，作為儲(chǔ)備溶液。
7.7苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)混合使用溶液：取苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液各10.0mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1mg/mL。經(jīng)濾膜(0.45μm)過(guò)濾(同時(shí)測(cè)定糖精鈉時(shí)可加GB/T5009.28中3.4糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液)。
8儀器
高效液相色譜儀(帶紫外檢測(cè)器)。
9分析步驟
9.1樣品處理
9.1.1汽水：稱取5.00～10.0g樣品，放入小燒杯中，微溫?cái)嚢璩ザ趸迹冒彼?1＋1)調(diào)pH約7。加水定容至10～20mL，經(jīng)濾膜(0.45μm)過(guò)濾。
9.1.2果汁類：稱取5.00～10.0g樣品，用氨水(1＋1)調(diào)pH約7，加水定容至適當(dāng)體積，離心沉淀，上清液經(jīng)濾膜(0.45μm)過(guò)濾。
9.1.3配制酒類：稱取10.0g樣品，放入小燒杯中，水浴加熱除去乙醇，用氨水(1＋1)調(diào)pH約7，加水定容至適當(dāng)體積，經(jīng)濾膜(0.45μm)過(guò)濾。
9.2高效液相色譜參考條件
9.2.1色譜柱：YWG－C184.6mm×250mm10μm不銹鋼柱。
9.2.2流動(dòng)相：甲醇：乙酸銨溶液(0.02m0l/L)(5：95)。
9.2.3流速：1mL/min。
9.2.4進(jìn)樣量：10μL。
9.2.5檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)230μm，靈敏度0.2AUFS。
根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積法定量。
9.3計(jì)算
式中：X2——樣品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg；
m3——進(jìn)樣體積中苯甲酸或山梨酸的質(zhì)量，mg；
V4——進(jìn)樣體積，mL；
V3——樣品稀釋液總體積，mL；
m4——樣品質(zhì)量，g。
結(jié)果的表述：報(bào)告算術(shù)平均值的二位有效數(shù)。
9.4允許差：相對(duì)相差≤10%。
9.5其他
同GB/T5009.28的5.6。
注：本方法可同時(shí)測(cè)定糖精鈉。
第三篇薄層色譜法(第三法)
10原理
樣品酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。將樣品提取液濃縮，點(diǎn)于聚酰胺薄層板上，展開(kāi)。顯色后，根據(jù)薄層板上苯甲酸、山梨酸的比移值，與標(biāo)準(zhǔn)比較定性，并可進(jìn)行概略定量。
11試劑
11.1異丙醇。
11.2正丁醇。
11.3石油醚：沸程為30～60℃。
11.4乙醚：不含過(guò)氧化物。
11.5氨水。
11.6無(wú)水乙醇。
11.7聚酰胺粉：200目。
11.8鹽酸(1＋1)：取100mL鹽酸，加水稀釋至200mL。
11.9氯化鈉酸性溶液(40g/L)：于氯化鈉溶液(40g/L)中加少量鹽酸(1＋1)酸化。
11.10展開(kāi)劑。
11.10.1正丁醇＋氨水＋無(wú)水乙醇(7＋1＋2)。
11.10.2異丙醇＋氨水＋無(wú)水乙醇(7＋1＋2)。
11.11山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.2000g山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于2.0mg山梨酸。
11.12苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.2000g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于2.0mg苯甲酸。
11.13顯色劑：溴甲酚紫－乙醇(50%)溶液(0.4g/L)，用氫氧化鈉溶液(4g/L)調(diào)至pH＝8。
12儀器
12.1吹風(fēng)機(jī)。
12.2層析缸。
12.3玻璃板：10cm×18cm。
12.4微量注射器：10μL，100μL。
12.5噴霧器。
13操作方法
13.1樣品提取
稱取2.50g事先混合均勻的樣品，置于25mL帶塞量筒中，加0.5mL鹽酸(1＋1)酸化，用15，10mL乙醚提取兩次，每次振搖1min，將上層醚提取液吸入另一個(gè)25mL帶塞量筒中，合并乙醚提取液。用3mL氯化鈉酸性溶液(40g/L)洗滌兩次，靜止15min，用滴管將乙醚層通過(guò)無(wú)水硫酸鈉濾入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混勻。吸取10.0mL乙醚提取液分兩次置于10mL帶塞離心管中，在約40℃的水浴上揮干，加入0.10mL乙醇溶解殘?jiān)�，備用�?
13.2測(cè)定
13.2.1聚酰胺粉板的制備：稱取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加約7mL水，研磨3～5min，立即倒入涂布器內(nèi)制成10cm×18cm、厚度0.3mm的薄層板兩塊，室溫干燥后，于80℃干燥1h，取出，置于干燥器中保存。
13.2.2點(diǎn)樣：在薄層板下端2cm的基線上，用微量注射器點(diǎn)1μL、2μL樣品液，同時(shí)各點(diǎn)1μL、2μL山梨酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。
13.2.3展開(kāi)與顯色：將點(diǎn)樣后的薄層板放入預(yù)先盛有展開(kāi)劑(11.10.1或11.10.2)的展開(kāi)槽內(nèi)，展開(kāi)槽周圍貼有濾紙，待溶劑前沿上展至10cm，取出揮干，噴顯色劑，斑點(diǎn)成黃色，背景為藍(lán)色。樣品中所含山梨酸、苯甲酸的量與標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)比較定量(山梨酸、苯甲酸的比移值依次為0.82，0.73)。
13.3計(jì)算
式中：X3——樣品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg；
m5——測(cè)定用樣品液中苯甲酸或山梨酸的質(zhì)量，mg；
V5——加入乙醇的體積，mL；
V6——測(cè)定時(shí)點(diǎn)樣的體積，mL；
m6——樣品質(zhì)量，g；
10——測(cè)定時(shí)吸取乙醚提取液的體積，mL；
25——樣品乙醚提取液總體積，mL。
注：本方法還可以同時(shí)測(cè)定果醬、果汁中的糖精。
第四篇禁用防腐劑定性試驗(yàn)(第四法)
14硼酸、硼砂
14.1試劑
14.1.1鹽酸(1＋1)：量取鹽酸100mL，加水稀釋至200mL。
14.1.2碳酸鈉溶液(40g/L)。
14.1.3氫氧化鈉溶液(4g/L)：稱取2g氫氧化鈉，溶于水并稀釋至500mL。
14.1.4姜黃試紙：稱取20g姜黃粉末，用冷水浸漬4次，每次各100mL，除去水溶性物質(zhì)后，殘?jiān)?00℃干燥，加100mL乙醇，浸漬數(shù)日，過(guò)濾。取1cm×8cm濾紙條，浸入溶液中，取出，于空氣中干燥，貯于玻璃瓶中。
14.2分析步驟
14.2.1樣品處理
稱取3～5g固體樣品，加碳酸鈉溶液(40g/L)充分濕潤(rùn)后，于小火上烘干、炭化后再置高溫爐中灰化。量取10～20mL液體樣品，加碳酸鈉溶液(40g/L)至呈堿性后，置水浴上蒸干、炭化后再置高溫爐中灰化。
14.2.2定性試驗(yàn)
14.2.2.1姜黃試紙法：取一部分灰分，滴加少量水與鹽酸(1＋1)至微酸性，邊滴邊攪拌，使殘?jiān)芙�，微溫后過(guò)濾。將姜黃試紙浸入濾液中，取出試紙置表面皿上，于60～70℃干燥，如有硼酸、硼砂存在時(shí)，試紙顯紅色或橙紅色，在其變色部分熏以氨即轉(zhuǎn)為綠黑色。
14.2.2.2焰色反應(yīng)
取灰分置于坩堝中，加硫酸數(shù)滴及乙醇數(shù)滴，直接點(diǎn)火，硼酸或硼砂存在時(shí)，火焰呈綠色。
15水楊酸
15.1試劑
15.1.1三氯化鐵溶液(10g/L)。
15.1.2亞硝酸鉀溶液(100g/L)。
15.1.3乙酸(50%)。
15.1.4硫酸銅溶液(100g/L)。稱取10g硫酸銅(CuSO4?H2O)，加水溶解至100mL。
15.2分析步驟
15.2.1樣品提取
按GB/T5009.28中9.1操作，將乙醚提取液蒸干后，殘?jiān)鼈溆谩?
15.2.2定性試驗(yàn)
15.2.2.1三氯化鐵法：殘?jiān)?～2滴三氯化鐵溶液(10g/L)，水楊酸存在時(shí)顯紫堇色。
15.2.2.2確證試驗(yàn)：溶解殘?jiān)谏倭繜崴�，冷后�?～5滴亞硝酸鉀溶液(100g/L)，4～5滴乙酸(50%)及1滴硫酸銅溶液(100g/L)，混勻，煮沸0.5h，放置片刻，水楊酸存在時(shí)呈血紅色(苯甲酸不顯色)。
附加說(shuō)明：
本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部衛(wèi)生監(jiān)督司提出。
本標(biāo)準(zhǔn)第一法由衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所負(fù)責(zé)起草；第二法由天津食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所、遼寧省食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所、武漢市衛(wèi)生防疫站、浙江省衛(wèi)生防疫站、四川省衛(wèi)生防疫站負(fù)責(zé)起草；第三、四法由衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所負(fù)責(zé)起草。
本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部委托技術(shù)歸口單位衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所負(fù)責(zé)解釋
