如何提取及測(cè)定海帶中的葉綠素
如何提取及測(cè)定海帶中的葉綠素
海帶是一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高的蔬菜，由于海水可被利用的光能要比陸地上少得多，要完成能量的轉(zhuǎn)換，必須增高參與光合作用的葉綠素的含量。所以，一般來(lái)說(shuō)，海帶中葉綠素和其他輔助色素的含量高于陸生植物。葉綠素依其結(jié)構(gòu)不同可分為葉綠素a和葉綠素b，其基本結(jié)構(gòu)都是鎂結(jié)合的卟啉環(huán)。當(dāng)前測(cè)定葉綠素的常規(guī)方法多為溶劑浸提-可見(jiàn)分光光度法，用超聲波萃取分離出葉綠素，然后用氫離子置換出鎂離子，再用原子吸收分光光度法測(cè)鎂的量即可計(jì)算出海帶中葉綠素的含量，以及專(zhuān)業(yè)的葉綠素測(cè)量?jī)x法。這些方法都是葉綠素測(cè)定的最常用方法，我們?cè)诰唧w操作過(guò)程中，要按照不同的需求，進(jìn)行合理的選擇。
葉綠素提取方法：稱取4g粉碎后的海帶于燒杯中，加入30mL有機(jī)提取劑，用保鮮膜封口，室溫200W超聲波提取20min，過(guò)濾，收集濾液。移取8mL濾液于分液漏斗中，加入4mL的石油醚和等量飽和氯化鈉溶液萃取，加12mL的超純水洗滌有機(jī)相，重復(fù)萃取兩次，洗去提取溶劑及無(wú)機(jī)態(tài)鹽類(lèi)，合并石油醚相。于石油醚相中加入0.9mol/L鹽酸15mL反萃取15min，分取水相，用超純水定容于50mL容量瓶中，用原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定此溶液中鎂的質(zhì)量濃度。測(cè)定條件為空氣-乙炔火焰，鎂波長(zhǎng)285.2nm，狹縫寬度0.2nm，燈電流3mA，燃燒器高度5.0mm。原子吸收法測(cè)定海帶中葉綠素含量的計(jì)算，見(jiàn)式(1)。葉綠素含量/(mg/g)=[C×V1×899.3×V3]/V2×m×24×1000(1)。式中：C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線得被測(cè)試液中鎂的質(zhì)量濃度/(μg/mL)；m為稱樣量/g；V1為混合提取液的總體積/mL；V2為移取石油醚相的體積/mL；V3為返萃水相的定容體積/mL；899.3為葉綠素a、葉綠素b的平均摩爾質(zhì)量/(g/mol)；24為鎂的摩爾質(zhì)量/(g/mol)。
采用超聲波提取法對(duì)海帶中葉綠素進(jìn)行提取，原子吸收光譜法對(duì)提取出的葉綠素中的鎂離子進(jìn)行測(cè)定，從而間接得出海帶中葉綠素的含量。結(jié)果表明，超聲波提取葉綠素的最佳工藝條件：以無(wú)水乙醇與丙酮體積比1:1的混合液為提取劑，按料液比2:15(g/mL)，在室溫下超聲波選擇200W的功率提取2次，每次20min。反萃取的最佳測(cè)定工藝條件：用濃度為0.9mol/L的鹽酸15mL進(jìn)行反萃取15min。原子吸收法測(cè)定檢出限為0.008μg/mL，海帶中葉綠素的含量5.486mg/g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.675%，回收率97.7%。此方法表明：原子吸收光譜法受干擾程度小，且精密度、靈敏度和準(zhǔn)確度較高。
